产品货号:
SNM185
中文名称:
全血乳酸测定试剂盒(比色法)
英文名称:
Lactic Acid assay kit
产品规格:
50管/48样
发货周期:
1~3天
产品价格:
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以NAD+为氢受体,LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸,使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物,呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。
- 快速简便:全程约30分钟,可测48例左右样本。
- 取样量微:本法取样量50~100μL即可
- 稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
- 再现性好:变异系数CV=1.7%。
- 回收试验:X =99%。
- 受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
组分 | 规格 | 说明 |
蛋白沉淀剂 | 50mL | 室温保存6个月,如有结晶,则取上清进行实验。 |
试剂一:酶稀释液 | 60mL | 4~8℃保存6个月。 |
试剂二:酶贮备液 | 0.6mL | 4~8℃保存6个月;用时用一次性吸头进行取样。 |
试剂三:显色溶液 | 2×6mL | 4℃~8℃避光保存6个月。 |
试剂四:粉剂 | 2支 | 短期内使用可放4~8℃,长期(6个月)请置-20℃。 |
试剂五:终止液 | 2×60mL | 4~8℃保存6个月。 |
试剂六:3mmol/L标准液 | 2mL | 4~8℃保存6个月。 |
- 分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为530nm)
- 恒温水浴箱或气浴箱(孵育温度为37℃)
- 台式离心机
- 漩涡混匀器
- 微量移液器
- 酶工作液的配制:
临用前将试剂二(酶贮备液)和试剂一(酶稀释液)按照1︰100的体积比进行混合,现用现配,4℃保存24小时内有效。 - 显色剂的配制:
取1瓶试剂三,转移1mL进入一支试剂四粉剂中,反复颠倒离心管混匀,待粉剂溶解后,再用微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中,再从这瓶试剂三中移出1mL到原试剂四离心管中,如此反复2~3次,使二者充分混合溶解,配成显色剂,2~8℃避光保存2周内有效。- 粉剂量较少,可能附着于管壁或盖子上,并非空管,如果使用肉眼不可见,可将其4000转/分钟离心2分钟后使用。
- 应取空腹或静止状态下的静脉血,并避免血液淤滞,如用止血带,应在针头刺入静脉后马上放开,然后等2分钟后再抽血。
- 血液要新鲜,最好是当天完成,如果当天完不成,可将样本进行样本前处理后,将上清液4℃或-20℃保存可稳定15~30天。
- 蛋白沉淀剂如有结晶,则取上清进行实验。
- 在批量实验前需要进行预实验,以确定测定绝对OD(OD测定-OD空白)在0.05~0.35之间。如果测定绝对OD小于0.05,则需要加大样本浓度重新测定;如果测定绝对OD大于0.35,则需要将样本稀释后重新测定。
- 前处理:
上清液制备:取待测样本0.1mL,加入蛋白沉淀剂0.6mL混匀,3500~4000转/分,离心10分钟,取上清液进行测定。- 全血及时用蛋白沉淀剂制备成乳酸上清液。
- 制成的乳酸上清冰箱4℃或者0℃以下保存,15~30天稳定不变。
- 如果您的血样很少,您可以取0.05mL全血加0.3mL蛋白沉淀剂。
- 全血及时用蛋白沉淀剂制备成乳酸上清液。
- 操作表:
成分(mL) 空白管 标准管 测定管 双蒸水 0.02 3mmol/L标准液 0.02 上清液 0.02 酶工作液 1 1 1 显色剂 0.2 0.2 0.2 混匀,37℃水浴准确反应10分钟 终止液 2 2 2 混匀,530nm,1cm光径,双蒸水调零,测各管吸光度。
- 计算公式:
全血中乳酸含量
(mmol/L)= A测定-A空白 × 标准浓度
(3mmol/L)× 样本前处理*
稀释倍数(7倍)A标准-A空白
注*:0.1mL全血加0.6mL蛋白沉淀剂,或者取0.05mL全血加0.3mL蛋白沉淀剂,所以稀释7倍。 - 计算举例:
例1:取小鼠新鲜的抗凝全血0.1mL加0.6mL的蛋白沉淀剂进行样本前处理,取上清20μL进行乳酸测定,测得空白管吸光度为0.076,标准管吸光度为0.384,测定管吸光度为0.280。则计算结果为:全血中乳酸含量
(mmol/L)= 0.280-0.076 ×3×7=13.909mmol/L 0.384-0.076
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